近年來，瘋牛病、瘦肉精事件的連續(xù)發(fā)生，人們震驚之余發(fā)現(xiàn)飼料在某種條件下不僅構(gòu)成了對(duì)動(dòng)物和人類健康的嚴(yán)重威脅，而且造成了意想不到的經(jīng)濟(jì)損失和巨大的政治影響。飼料**作為食品**中的一個(gè)源頭環(huán)節(jié)，成了上至國際組織、政府部門，下至平民百姓，各個(gè)層面廣泛關(guān)注的熱點(diǎn)問題。世界上很多國家及非政府組織都積極加人了飼料、食品**控制行列。各個(gè)國家與地區(qū)也都加大力度強(qiáng)化相關(guān)的組織機(jī)構(gòu)，制定一系列的法律法規(guī)，如美國、日本修訂了飼料**法，歐盟成立了歐洲食品管理局，并將實(shí)行新的飼料食品管理法規(guī)，我國也頒布了《飼料和飼料添加劑管理?xiàng)l例》，實(shí)施了飼料**工程。然而，再好的政策和措施都離不開飼料檢測的技術(shù)支持，檢測結(jié)果不僅是制定政策和標(biāo)準(zhǔn)如MRL的科學(xué)基礎(chǔ)，也是采取重***律行動(dòng)和解決貿(mào)易糾紛的重要依據(jù)。近年來，執(zhí)行*有效、影響面*廣的是飼料食品**檢測中有關(guān)違禁藥品及獸藥殘留執(zhí)法分析的逐級(jí)檢測法。主要為篩選法、確證法和定量法。

篩選法是實(shí)施檢測的**步，用于大量樣品的高通量分析。目的是檢測某種或某類危害物是否存在。它簡單快速不需要特殊的場地，不需要大型儀器設(shè)備，花費(fèi)一般也較低。篩選法基于許多原理，但目前應(yīng)用*多的是酶聯(lián)**法(ELISA)。如飼料中違禁藥品鹽酸克侖特羅、萊克多巴胺、安定、呋喃唑酮、己西雌酚的檢測，尿液中鹽酸克侖特羅、豬肝鹽酸克侖特羅、牛奶中氯霉素的殘留檢測的各種試劑盒都屬酶聯(lián)**法(ELISA)。

自治區(qū)獸藥飼料監(jiān)察所從2000年就開始用酶聯(lián)**法檢測飼料中鹽酸克侖特羅，到2004年開始大批量承擔(dān)農(nóng)業(yè)部及自治區(qū)下達(dá)的飼料**檢測項(xiàng)目，主要為飼料、飲水、尿液中鹽酸克侖特羅、萊克多巴胺、安定、呋喃唑酮、己西雌酚的檢測。根據(jù)農(nóng)業(yè)部要求首先用酶聯(lián)**法進(jìn)行篩選，檢測出陽性者用高效液相色譜儀和氣質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行確證和定量。本人就這幾年應(yīng)用酶聯(lián)**法進(jìn)行初篩檢測中存在的問題及注意事項(xiàng)進(jìn)行探討，以供同行參考。 

1、試劑盒的選擇

目前酶聯(lián)**法檢測用試劑盒種類繁多，有國外進(jìn)口的，有國內(nèi)自行研制生產(chǎn)的，如何在眾多的品牌中選擇既能滿足檢測要求又價(jià)格低廉的試劑盒是一個(gè)問題。本人根據(jù)使用這些試劑盒，在實(shí)際檢測中發(fā)現(xiàn)，一般在試劑盒說明書中列出以下指標(biāo)：*低檢測限；回收率；交叉反應(yīng)率；標(biāo)準(zhǔn)曲線圖譜及數(shù)據(jù)，標(biāo)準(zhǔn)曲線至少由5個(gè)濃度組成；IC50測定值及變形曲線點(diǎn)數(shù)目的是比較規(guī)范的試劑盒，可以選擇。

2、臨界值(cut-off)的確定

在實(shí)際使用酶聯(lián)**法檢測時(shí)要首先確定臨界值。通過檢測結(jié)果與臨界值的比較，可判定樣品為陰性或可疑。對(duì)于禁用**，檢測方法的臨界值為定量限，即現(xiàn)有的公認(rèn)的儀器檢測所能達(dá)到的*低定量限。對(duì)于有*高殘留限量(MRL)的**，檢測方法的臨界值為20份添加MRL濃度的樣品重復(fù)3次測定的均值減去1．64倍標(biāo)準(zhǔn)差。檢測結(jié)果如小于臨界值為陰性，大于或等于臨界值或標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定為可疑，需要用確證法確證。

3、檢測限的測定 可添加MRL和MRL上下各一個(gè)濃度。

每個(gè)試驗(yàn)室在使用酶聯(lián)**法檢測時(shí)，應(yīng)做一下各自試驗(yàn)室的檢測限。檢測限為20份空白樣品測定的均值加3倍標(biāo)準(zhǔn)差。如果經(jīng)規(guī)范操作后所得檢測限大于臨界值時(shí)，說明試劑盒背景干擾大，試劑盒靈敏度不能滿足檢測要求，應(yīng)與試劑盒廠家聯(lián)系或棄去不用選用另外的試劑盒。

4、酶聯(lián)**檢測方法驗(yàn)證

在使用酶聯(lián)**法檢測樣品時(shí)，應(yīng)對(duì)方法進(jìn)行驗(yàn)證。主要測定以下內(nèi)容：

（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定，標(biāo)準(zhǔn)曲線至少由5個(gè)濃度組成，測定次數(shù)不少于5次，以確定工作濃度范圍和IC50范圍。一般臨界值為IC50附近，檢測靈敏度高。

（2）樣品檢測限的測定。

（3）樣品添加回收實(shí)驗(yàn)。對(duì)禁用**可添加定量限和2倍定量限，對(duì)于有*高殘留限量(MRL)的**，可添加MRL和MRL上下各一個(gè)濃度。

準(zhǔn)確度：若回收率大于40％符合相應(yīng)檢測標(biāo)準(zhǔn)的要求。精密度：批內(nèi)變異系數(shù)每批平行樣之間的變異系數(shù)小于或等于25％，對(duì)于禁用**小于或等于30％。批間變異系數(shù)所有樣品間變異系數(shù)小于或等于30％，對(duì)于禁用**小于或等于40％。

滿足以上準(zhǔn)確度和精密度要求，說明酶聯(lián)**方法可行，可用來檢測**殘留。

5、其他

（1）對(duì)于可用于多殘留檢測的試劑盒，以交叉反應(yīng)率低的**做陽性添加測定臨界值(cut-off)。

（2）實(shí)際檢測樣品時(shí)要包括以下實(shí)驗(yàn)：至少做兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線，兩個(gè)陰性對(duì)照品，兩個(gè)添加臨界值(cut-off)的陽性對(duì)照品，兩個(gè)平行的待檢樣品。檢測結(jié)果出來后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線形狀(符合檢測要求為S形)，IC50與臨界值是否相近及陽性樣品回收率，樣品平行情況可確定檢測是否可信。