Elisa實(shí)驗(yàn)前樣本提取常識(shí):
—液體類標(biāo)本
包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
——血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
——血漿
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
——尿液
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
樣本離心時(shí)注意:一般的不能控制溫度的離心機(jī)*好不要用來(lái)離心樣本,能控制溫度的離心機(jī)調(diào)到2-8度就可以了,因?yàn)槠胀x心機(jī)離心會(huì)對(duì)樣品有一定的影響,因?yàn)殡x心機(jī)轉(zhuǎn)子會(huì)發(fā)熱,如果離心時(shí)間不常問題就不大,離心時(shí)間過長(zhǎng)影響還是蠻大的
理論上提取樣本為每孔10ul,實(shí)驗(yàn)一般檢測(cè)損耗大概是一半(也就是說(shuō)1ml只能用0.5ml),實(shí)際每孔上樣50-100ul即可!