探討影響FAME全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)的檢測(cè)因素
作者單位：212001 江蘇省鎮(zhèn)江市中心血站

作者簡(jiǎn)介：朱陽(yáng)泉(1967-)，男，江蘇鎮(zhèn)江人，主管技師，本科，

主要從事輸血傳播**和血型研究。電話：0511-5021106，E-mail：yangquanzhu@yahoo.com。

【摘要】 目的探討3種常見(jiàn)的影響全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果的因素，提高EIISA法檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。方法(1)隨機(jī)選擇對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組各44份無(wú)償獻(xiàn)血者血樣，分別進(jìn)行兩種不同方式的抗凝，應(yīng)用FAME全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)進(jìn)行HBsAg、抗一HCV、抗一HIV、TP4個(gè)項(xiàng)目檢測(cè)，比較兩組檢測(cè)結(jié)果。(2)在全自動(dòng)加樣儀的加樣高度設(shè)置中，不斷增加加樣高度，觀察FAME對(duì)4個(gè)質(zhì)控血清平行孑L的檢測(cè)效果。(3)在不同溫度的FAME洗液下，對(duì)88份正常的無(wú)償獻(xiàn)血者血樣進(jìn)行4個(gè)項(xiàng)目檢測(cè)，觀察不同溫度的洗液對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。結(jié)果(1)除抗一HCV外，實(shí)驗(yàn)組中其他3項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果均有假陽(yáng)性出現(xiàn)，且陰性標(biāo)本的S／CO值明顯高于對(duì)照組(P)

【關(guān)鍵詞】FAME全自動(dòng)酶免系統(tǒng) EIISA 影響因素

【中圖分類(lèi)號(hào)】R446．1 R446．61 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】l671-2587(2004)04-0254-03

Study of the influential factors on ELISA using the microlabFAME system ZHU Yangquan，X Changgen，DAI Ruidi，

et a1．Zhenjiang Blood Center of Jiangsu Province，Zhenjiang212001

[Abstract] Objective To study the three types of common factorswhich influence the results of the microlab FAM E system on EIISA．M ethods (1)There were 44 random samples in experimental groupand control group respectively，which were anti-curdled in differentlevels．Then FAME was used tO test HBsAg.anti-HCV，anti-HIV and TPrespectively and the difference between the two groups werecompared．(2)W hile increasing the dispensing height of the AT plus2 in series on the basis of original default，the effects caused bythem were assayed after using FAME through four items of parallelquality-controlled sera．(3)The results were detected using FAM Eunder the different temperature of wash solution，through 4 items ofEI ISA on 88 samples of normal voluntary donors．Results (1)In theexperimental group ，fault positive results emerged in three itemsexcept anti-HCV ，and the S f Co of negative samples was much higherthan that i,I control group (P< 0.001)。(2)W hen dispensingheight was lower than 9.1 mm 。fault positive results emerged inanti-HCV ，and the CV of four items were higher than norma1．(3)W henthe wash solution temperature was lower than l4℃ ，the faultpositive results emerged and CV were higher than usual exceptanti-HCV．Conclusion The accurate resuits can be gained only whenthe blood samples were anti-curdled thoroughly，the dispensingheight and the wash solution temperatures were suitable．

[Key words] Microlab FAME system ELISA Influential factors

近年來(lái)，很多采供血機(jī)構(gòu)相繼引進(jìn)了全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)用于酶聯(lián)**吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)，全自動(dòng)酶**測(cè)設(shè)備在過(guò)程處理的速度、準(zhǔn)確性精密度和重復(fù)性方面均優(yōu)于手工操作。本站于1999年引進(jìn)FAME全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)及配套ATplus2全自動(dòng)加樣儀，在使用中發(fā)現(xiàn)，除了檢測(cè)試劑本身的穩(wěn)定性、靈敏度和特異性等因素影響檢測(cè)結(jié)果外，很多操作方面的問(wèn)題，如樣本抗凝處理、加樣高度設(shè)置及不同洗液溫度等環(huán)節(jié)都會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性造成不同程度的影響，甚至得到假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果，現(xiàn)報(bào)告如下。

一、材料與方法

1、儀器與試劑

DL一5低速離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)；AT plus2全自動(dòng)加樣儀及FAME全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)(瑞士HAMILTON公司)；FAMEV2.1C和AUSLABV2.5應(yīng)用軟件由北京AUS-BIO公司提供；HBsAg、抗一HCV、抗一HIV、TP等4種**檢測(cè)試劑盒由廈門(mén)英科新創(chuàng)科技有限公司提供，均在有效期內(nèi)使用。操作程序的編制嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行，4個(gè)項(xiàng)目的室內(nèi)質(zhì)控血清由衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心提供，濃度分別為HBsAg1ng／ml、抗一HCV 2 NCU／ml、抗一HIV 4 NCU／ml、TP 2 NCU／ml，批號(hào)0309.

2 、方法

（1）樣本抗凝方法對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響：將88份無(wú)償獻(xiàn)血者血樣隨機(jī)分為兩組，對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組各44份，對(duì)照組血樣(m1)和肝素(u)的比例為1：10，實(shí)驗(yàn)組血樣(m1)和肝素(U)的比例為1：2.室溫下，兩組血樣經(jīng)3000 r／min離心5min后均有較好的分層，血漿呈液態(tài)，肉眼觀察兩組血樣無(wú)區(qū)別。分別在HBsAg、抗一HCV、抗一HIV和TP等4項(xiàng)ELISA檢測(cè)項(xiàng)目的酶標(biāo)板上設(shè)空白對(duì)照2孔、陰性對(duì)照3孔、陽(yáng)性對(duì)照2孑L、質(zhì)控1孔，其余88孔用于兩組血樣的檢測(cè)。若檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，重新取樣后用相同試劑雙孔復(fù)測(cè)，若雙孔均為陰性，則確定原檢測(cè)結(jié)果為假陽(yáng)性。

（2）加樣高度設(shè)置對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響：在AT plus2容器參數(shù)編輯過(guò)程中，**測(cè)量酶標(biāo)板的孔徑和高度，并進(jìn)行加樣定位，確保12根一次性加樣針均在對(duì)應(yīng)微孔的中央。在加樣程序編輯中，加樣步驟及加樣體積按試劑說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行，加樣高度在軟件缺省值(8.1mm)的基礎(chǔ)上分別增加0.5、1.0、1.5、2.0和2.5mm。檢測(cè)樣本用4個(gè)室內(nèi)質(zhì)控血清替代，各項(xiàng)試驗(yàn)平行檢測(cè)2孔，對(duì)照用手工加樣，保證CUTOFF值計(jì)算準(zhǔn)確。觀察檢測(cè)結(jié)果是否有假陰性及原始OD值的變異系數(shù)(CV)。

（3）洗液溫度對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響：用10℃蒸餾水對(duì)濃縮洗滌液進(jìn)行20倍稀釋，充分混勻，待完全溶解后加入FAME洗液桶，并用37℃水浴箱分別對(duì)其水浴加熱至14℃、18℃、22℃、26℃后用于檢測(cè)。

樣本選用88份正常的完全抗凝的無(wú)償獻(xiàn)血者血樣，為降低因試劑造成的誤差，4個(gè)項(xiàng)目在不同洗液溫度下的檢測(cè)均采用同一批號(hào)的試劑，于2周內(nèi)完成。觀察檢測(cè)結(jié)果是否有假陽(yáng)性及原始OD值的變異系數(shù)。

3、 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用t檢驗(yàn)。

二、結(jié) 果

1、不同抗凝條件下的兩組血樣經(jīng)FAME處理后的4項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1.實(shí)驗(yàn)組4個(gè)項(xiàng)目的檢測(cè)結(jié)果中，除抗一HCV外，其他3個(gè)項(xiàng)目均有陽(yáng)性結(jié)果出現(xiàn)，經(jīng)雙孔復(fù)測(cè)后為陰性，表明均為假陽(yáng)性，兩組陰性結(jié)果的S／CO值比較，除抗一HCV外，其余3項(xiàng)的差異均有顯著性(P<0．001)。

2、不同加樣高度下，4種質(zhì)控血清的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2.在5種加樣高度中，前3種加樣高度(含缺省值)對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響較大，尤其是抗一HCV檢測(cè)，有假陰性結(jié)果出現(xiàn)。當(dāng)加樣高度大于9．1mm時(shí)，對(duì)4項(xiàng)指標(biāo)的影響較小，CV≤15 。

三、討 論

FAME全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)克服了手工操作的局限性，避免了人為因素帶來(lái)的偶然誤差，使試驗(yàn)的精密度、重復(fù)性、靈敏度、特異性有所提高。但在臨床檢驗(yàn)工作中，各實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際情況不盡相同，如果對(duì)各實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，排除潛在的影響因素，可以*大限度地降低檢測(cè)的系統(tǒng)誤差。標(biāo)本處理的質(zhì)量直接影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，收縮良好的非溶血、非脂血，且經(jīng)過(guò)充分離心的血清樣本是ELISA試驗(yàn)的理想標(biāo)本。但在血站日常工作中，ABO正定型、Rh血型等項(xiàng)目的檢測(cè)往往采用抗凝血樣。肝素因抗凝效果好、配制和使用方便而被優(yōu)選。但肝素抗凝血的穩(wěn)定性差，隨血樣保存時(shí)間和溫度改變而有所變化。當(dāng)肝素比例不充分或血樣保存時(shí)間較長(zhǎng)時(shí)，血漿樣本經(jīng)FAME孵育后會(huì)發(fā)生部分纖維蛋白析出，在酶標(biāo)板微孔中呈凝膠狀，直接影響檢測(cè)結(jié)果，甚至導(dǎo)致FAME吐板。而抗一HCV因樣本用量少(10ul)，且被多倍稀釋，故所受影響不明顯。由于FAME為封閉式處理系統(tǒng)，此現(xiàn)象不易**作者發(fā)現(xiàn)。因此，用肝素抗凝血樣時(shí)，抗凝劑必須充足，標(biāo)本應(yīng)盡量在24h內(nèi)檢測(cè)。在加樣的準(zhǔn)確性方面，加樣儀的加樣高度設(shè)置是重要環(huán)節(jié)之一。不同廠家生產(chǎn)的試劑中，酶標(biāo)板的孑L徑、高度及精密性都有差異，因此，不同廠家的試劑應(yīng)具體對(duì)待。在加樣編程中，加樣高度應(yīng)反復(fù)摸索，缺省高度只能作為參考。當(dāng)加樣高度較小時(shí)，由于血樣表面的張力作用，易在加樣針尖形成微小掛珠，導(dǎo)致加樣誤差，如果加樣體積較小，則會(huì)發(fā)生漏加現(xiàn)象(表2中的抗一HCV)，造成假陰性結(jié)果；當(dāng)適當(dāng)增加加樣高度后，即縮短了加樣針尖與微孔底部的距離，掛珠的血樣接觸到孔底或樣本稀釋液，在重力和液體表面張力的雙重作用下，樣本被完全加入微孔中。但加樣高度的設(shè)置不易過(guò)高，應(yīng)隨檢測(cè)項(xiàng)目而定，過(guò)高會(huì)導(dǎo)致不同檢測(cè)項(xiàng)目之間樣本稀釋液的交叉污染，可能對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成影響。

恰當(dāng)?shù)南礈煲簻囟葘?duì)保證FAME的洗板效果及檢測(cè)結(jié)果的重復(fù)性有重要意義。在無(wú)償獻(xiàn)血者標(biāo)本中，常常會(huì)有較多的不同程度的脂血樣本，一般認(rèn)為溶血、脂血樣本對(duì)ELISA檢測(cè)結(jié)果影響不大L3。但經(jīng)進(jìn)一步研究后發(fā)現(xiàn)，洗液在較低溫度下(小于14℃)，F(xiàn)AME的洗板效果明顯減弱，陰性樣本的檢測(cè)曲線變寬，嚴(yán)重脂血樣本可能會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性。在寒冷的冬季，當(dāng)實(shí)驗(yàn)室溫度低于14℃時(shí)，即使采取了升溫措施，使實(shí)驗(yàn)室溫度很快達(dá)到預(yù)定的室溫，但洗液溫度的上升會(huì)存在嚴(yán)重的滯后現(xiàn)象。因此，有必要對(duì)FAME洗液桶進(jìn)行適當(dāng)?shù)乃☆A(yù)溫，使洗液溫度達(dá)到18℃后再用于檢測(cè)，對(duì)保證FAME檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性起重要作用。

四、參考文獻(xiàn)

l .李玉笑，鄭優(yōu)榮，肖韶英，等。FAME酶標(biāo)分析系統(tǒng)在**輸血中的應(yīng)用[J]。廣東醫(yī)學(xué)，2002，23(5)：461-463．

2. 葛紅衛(wèi)，王鴻捷，張愛(ài)紅，等。FAME全自動(dòng)酶標(biāo)分析系統(tǒng)的應(yīng)用[J]。輸血雜志，1998，ll(3)：122-124．

3 .王昕。ELISA法檢測(cè)HBsAg的影響因素分析[J]。1晦床輸血與檢驗(yàn)，2001，3(2)：43．

4. 許斌，朱虎定。EI ISA檢測(cè)HBsAg影響因素的探討[J]。臨床檢驗(yàn)雜志，2000，18(4)：232．

5. 李天君，張印則。影響ELISA檢測(cè)結(jié)果的因素[J]。輸血雜志，2000，13(4)：250．









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