1、Q:要測(cè)定打疫苗三次的抗體的變化，當(dāng)ELISA標(biāo)化后，是不是要用同一個(gè)抗原的包被濃度，同一個(gè)血清的稀釋度，然后看OD值的變化？實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有多個(gè)，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)又如何處理呢？

A: nanwxd網(wǎng)友觀點(diǎn)：

關(guān)于是不是要用同一個(gè)抗原的包被濃度，同一個(gè)血清的稀釋度，然后看OD值的變化？

這是肯定的ELISA做得很好的話批間CV都要有10～15％左右，*好用同一個(gè)抗原，但對(duì)于包被的抗原濃度對(duì)OD的影響不是很大，只要不是差別太大即可?？寡瀹?dāng)然要用同一個(gè)稀釋度了。另外比較的話就必每批，每塊板上的樣品都要伴隨著一個(gè)參比品一同做，參比品（自己可以選定一個(gè)，如**次**獲得的抗血清憑取一個(gè)。當(dāng)然**是有一個(gè)間期的，參比品的保存是一個(gè)問(wèn)題，本試驗(yàn)中用的參比品為抗血清，我想以加入30％甘油-20度凍藏比較穩(wěn)妥）*好還是同一個(gè)這樣才能保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可比性。

分析：

（1）將同 一只動(dòng)物**不同時(shí)間后抗體產(chǎn)生的效價(jià)進(jìn)行比較。

（2）由上面可以得出一組數(shù)據(jù)，舉個(gè)例子即如某個(gè)**間期抗體升高2倍的有多少，升高4，8，16...的各有多少，然后可知大多數(shù)情況下可升高多少，即此種升高率的陽(yáng)性率，然后再用泊松分布證明此陽(yáng)性率是否附和總體在這個(gè)**間期增高的陽(yáng)性率，還是由于隨機(jī)誤差的原因使實(shí)驗(yàn)得到了這個(gè)結(jié)果。

（3）統(tǒng)計(jì)出不同間期的效價(jià)水平后，可以用方差分析進(jìn)行總體比較，證明不同間期**的效果差異是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；然后再兩兩之間進(jìn)行比較看看**效果*明顯的是哪個(gè)間期。

2、Q：血清做個(gè)什么樣的稀釋才能保證這個(gè)時(shí)候由血清的本底反應(yīng)造成的假陰性或者假陽(yáng)性少呢？用一份血清做瓊擴(kuò)，效價(jià)在1：8，沒(méi)有達(dá)到很好的結(jié)果，但是這份血清用ELISA測(cè)OD值是或許能夠達(dá)到一個(gè)很大值，這個(gè)問(wèn)題怎么解決？

A: nanwxd網(wǎng)友觀點(diǎn)：

（1）血清做個(gè)什么樣的稀釋才能保證這個(gè)時(shí)候由血清的本底反應(yīng)造成的假陰性或者假陽(yáng)性少呢？

本底反應(yīng)一般是造成假陽(yáng)性，對(duì)于假陰性hanyongjun_4675戰(zhàn)友的意思是說(shuō)實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)了ELISA做出來(lái)的是陰性，但瓊脂糖**擴(kuò)散是陽(yáng)性？是否由于假陰性的存在是有干擾的類似物存在？

（2）ELISA測(cè)得的OD值很高，但瓊擴(kuò)，效價(jià)不高，只有1：8

這個(gè)問(wèn)題對(duì)于不同個(gè)動(dòng)物之間也許會(huì)存在，但對(duì)于同一個(gè)動(dòng)物身上出現(xiàn)的可能性比較少，出現(xiàn)這種情況原因多為抗體親和力的問(wèn)題，還有非特異性干擾的因素，對(duì)于后者可以做陰性對(duì)照進(jìn)行消除，陰性對(duì)照可以有兩種方法：a.用沒(méi)有**的與被**動(dòng)物同種的動(dòng)物的血清做對(duì)照。b.對(duì)于用了佐劑的，*嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶?shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是應(yīng)該用幾只動(dòng)物只**不加抗原的佐劑，因?yàn)樽魟┍旧硪矔?huì)產(chǎn)生一定的抗體，這種抗體是否會(huì)與你**的抗原之間產(chǎn)生交叉反應(yīng)，這也是值得考慮的問(wèn)題。

此外還需要注意的一個(gè)問(wèn)題是，**早期產(chǎn)生的是IgM，后斯產(chǎn)生的是IgG，那么這就存在這兩種抗體水平的比較。同時(shí)也就要注意酶標(biāo)抗抗體的特異性的問(wèn)題，即有的抗抗體只針對(duì)IgG，而有的特異性則不太好。