酶聯(lián)**吸附試驗是用酶標(biāo)記的抗體（或SPA）檢測未知抗原或抗體的方法。此法敏感性高，特異性強。常用的是ELISA方法，間接法，雙抗體法和抗原法。本次試驗介紹，酶聯(lián)葡萄球菌蛋白A**分析法。ELISA法原理如下，見圖9

1、加抗原使之吸附于固相載體（如塑料反應(yīng)板） 

2、洗滌加待測血清 

3、洗滌加酶標(biāo)記SpA 

4、洗滌加酶的底物。經(jīng)酶的催化產(chǎn)生有色產(chǎn)物。

一、材料： 

1、聚乙烯塑料反應(yīng)板（PH9.6時可吸附蛋白Ag） 

2、抗原：傷寒桿菌O901煮沸或超聲波粉碎抗原 

3、待測血清 

4、凍干酶聯(lián)葡萄球菌A蛋白（HRD-proteinA）純品 

5、鄰苯二胺（OPD） 

6、包被液：0.05M碳酸鈉-碳酸氫鈉溶液PH9.6 

7、稀釋液：10%**血清PBS-吐溫20，防止非特異性吸附 

8、洗滌液：0.02MTrisTWeen20,Ph7.4防止非特異性吸附 

9、底物溶液：0.02M磷酸氫二鈉25.7毫升 

0.1M檸檬酸24.3毫升 

蒸餾水50毫升 

臨用前新鮮配制，在上述緩沖液中溶解40毫克鄰苯二胺，然后加入30%雙氧水0.15毫升，底物對光敏感，需要避光并立即使用。 

10、終止液；2M硫酸 

二、方法： 

1、抗原包被 

取潔凈的聚苯乙烯微量反應(yīng)板，于每孔內(nèi)加傷寒抗原0.1毫升（用包被緩沖液稀釋，蛋白含量10微克/毫升），置37℃1小時，棄抗原液，用洗滌液3次每次3分鐘。 

2、加待測血清 

于每孔內(nèi)分別加不同稀釋度（如1：5，1：10，1：20…1：80）的待測血清，PBS空白對照，陰性對照血清，陽性對照血清各0.1毫升。置37℃30分鐘，洗滌3次。 

3、加酶聯(lián)A蛋白 

于每孔加酶聯(lián)A蛋白各0.1毫升，置37℃20分鐘，洗滌3次。 

4、加臨時配制的底物溶液各0.1毫升，置暗處15分鐘。加2M碳酸1滴終止反應(yīng)。 

5、結(jié)果判斷：（肉眼判斷） 

若顏色于陰性對照相同則為陰性，若較陰性對照深則為陽性，根據(jù)顏色深淺以（+）表示。