蛋白的使用以及存儲
重組蛋白中不含載體蛋白(Carrier Protein)或其他添加劑(如BSA、HAS或蔗糖等),并且
通過常以*少量的鹽來進(jìn)行凍干處理,因此微量的細(xì)胞因子在凍干過程中會沉積于管內(nèi),形成很薄或不可見的蛋白層。所以我們建議在收到產(chǎn)品后,務(wù)必在開蓋前先離心,使粘在管蓋或管壁上的蛋白聚集于管底(此時能否見到白色沉淀均屬正常現(xiàn)象)。
1、 離心:高速離心(10000rpm)20-30秒,或低速離心(2000rpm)5分鐘。
2、 溶解:用去離子水或其他緩沖液(根據(jù)說明書要求進(jìn)行選擇)溶解至說明要求的濃度(一般為0.1-1.0mg/ml),如10ug的產(chǎn)品,需用10ul-100ul的去離子水或緩沖液溶解)。溶解時不可振蕩,避免因化學(xué)鍵的斷裂造成蛋白失活,可加入適當(dāng)?shù)娜軇┹p搖并靜置一段時間,待細(xì)胞因子完全溶解后使用。溶劑的選擇:
1) 要求用去離子水溶解的產(chǎn)品,務(wù)必不可用鹽溶液,避免過高的鹽濃度造成蛋白不可逆的析出;
2) 要求用鹽溶液溶解的產(chǎn)品,請依照說明書上的濃度,同樣也是為了避免過高的鹽濃度。
3、分裝和儲存:蛋白溶解后可根據(jù)自己的實驗需要進(jìn)一步稀釋成工作液,稀釋可用RPMI 1640、DMEM或PBS等溶液,其中*好含有5-10%的FCS(小牛或胎牛血清)或0.1%的BSA(牛血清白蛋白)來穩(wěn)定蛋白。工作液在4℃可保存一周,如需長期保存,則需分裝凍存于-20℃(注意:不可凍存于-80℃)。分裝時每管中工作液的體積*好是一次實驗的用量,以實現(xiàn)每次實驗用完一只工作量,避免反復(fù)凍融引起蛋白活性的降低。
細(xì)胞因子和蛋白的使用說明
1、 正確性:經(jīng)N端序列分析。必要時,使用SDS-PAGE,RP-HPLC和質(zhì)譜分析等方法與標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行比對。
2、 純度:經(jīng)SDS-PAGE和RP-HPLC分析。
3、 生物活性:經(jīng)相關(guān)的體外或體內(nèi)生物活性檢測。
4、 蛋白含量:經(jīng)紫外分光光度和SDS-PAGE分析。有些特殊產(chǎn)品的定量使用HPLC法與己校準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行比對。
5、 內(nèi)**含量:經(jīng)動態(tài)LAL(鱟試劑)法測定,所有產(chǎn)品內(nèi)**含量均低于標(biāo)示量。
6、 微生物污染:所有蛋白溶液在分裝凍干前經(jīng)0.22um濾膜過濾**,分裝在一萬級潔凈室條件下的超凈臺完成;凍干在一萬級潔凈室條件下完成。
為什么有些產(chǎn)品中我能看到白色蛋白粉末而有些產(chǎn)品管中看不到蛋白粉末?
答:與市場上的有些蛋白產(chǎn)品不同,絕大部分的產(chǎn)品中不含載體蛋白或其他添加物(如牛血清白蛋白(BSA),人血清白蛋白(HSA)和海藻糖等),并且以*低含鹽量的溶液凍干。因此,微量的蛋白在凍干過程中沉積在管內(nèi),形成很薄或幾乎看不見的蛋白層,甚至蛋白粉末還會飄懸在管壁上。打開管蓋前,我們建議在離心機(jī)中快速離心20-30秒,使附著在管蓋或管壁的蛋白粉末聚集到管底。
對于蛋白產(chǎn)品的穩(wěn)定性,我們應(yīng)該了解哪些信息?
答:除非在產(chǎn)品說明書中特別注明,我們絕大部分產(chǎn)品均為凍干粉,它們在室溫條件下非常穩(wěn)定。盡管如此,我們還是建議您將凍干粉產(chǎn)品儲存于-20℃冰箱中。對于大多數(shù)產(chǎn)品,復(fù)溶后在4℃條件下僅能短期保存。如果想長期保存,請先配置成稀釋液(其中須含載體蛋白,如0.1%BSA等),然后根據(jù)實驗情況分裝成小份凍存于-20℃,每次實驗僅取一小份,避免反復(fù)凍融。請注意,每次凍融均會引起蛋白的部分失活,而且不同蛋白失活的程度不一。