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技術(shù)文章

microRNA的產(chǎn)生
microRNA概要
microRNA（miRNA）是一種小的RNA，平均長(zhǎng)度是22個(gè)核苷酸，與目標(biāo)mRNA的3'UTR區(qū)域互補(bǔ)。miRNA在真核生物中高度保守，并且認(rèn)為它們?cè)诨虺聊杏兄匾饔谩Ｃ?，蛋白和microRNA都是作為RNA通路調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)的一部分。
微RNA的檢測(cè)方法主要是莖環(huán)RT-PCR，Northern雜交，原位雜交和基因芯片技術(shù)，而*常用的試劑是Ambion公司的小分子RNA提取試劑盒，請(qǐng)參閱 microRNA研究試劑回顧。 該文是來邦網(wǎng)*近的一份microRNA研究中使用的試劑綜述。


microRNA的產(chǎn)生
基因轉(zhuǎn)錄

多數(shù)情況下的 RNA聚合酶II和少數(shù)情況下的RNA聚合酶III從基因組序列上轉(zhuǎn)錄形成前體miRNA（pri-miRNA），這種miRNA可以是幾百或幾千個(gè)核苷酸的長(zhǎng)度，包含了多個(gè)miRNA莖環(huán)。就像調(diào)節(jié)mRNA分子一樣，pri-miRNA也是通過帽子結(jié)構(gòu)，多聚腺甘酸化以及空間結(jié)構(gòu)的折疊來保持其非活化狀態(tài)的。

核內(nèi)加工

一些pri-miRNA會(huì)經(jīng)過RNA的編輯，通常是通過作用于RNA的腺苷酸脫氨酶來實(shí)現(xiàn)的（參見 ADAR1)。由 DiGeorge氏綜合癥臨界區(qū)8(DGCR8, 也被稱作Pasha)和 Drosha酶形成的微處理器剪切pri-miRNA，形成pre-miRNA發(fā)夾序列。

核輸出

核質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 Exportin-5能夠識(shí)別pre-miRNA發(fā)夾序列3'端突出的兩個(gè)核苷酸并把其轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞質(zhì)中。

胞質(zhì)內(nèi)的加工

核酸酶 Dicer剪切pre-miRNA發(fā)夾序列的莖環(huán)，產(chǎn)生miRNA:miRNA雙鏈。miRNA:miRNA雙鏈的一條鏈參與到RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合體中發(fā)揮作用。
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