DIG-High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit I,地高辛檢測(cè)試劑盒,DIG High Prime Lab/Detection K
地高辛檢測(cè)試劑盒 DIG-High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit I
貨號(hào): 11745832910
羅氏科學(xué)應(yīng)用部（Roche Applied Science）是*早致力于向用戶提供非放射標(biāo)記技術(shù)的公司之一，讓更多的科研工作者們可以避免使用危險(xiǎn)的放射性同位素。自1995年羅氏**的地高辛產(chǎn)品上市以來，盡管陸續(xù)有許多出色的競(jìng)爭(zhēng)者涉足這一領(lǐng)域，盡管有定量PCR技術(shù)的應(yīng)用，DIG系統(tǒng)仍然是非放射性高效標(biāo)記—檢測(cè)技術(shù)的優(yōu)選，被廣泛地應(yīng)用各種膜雜交及原位雜交技術(shù)中。
技術(shù)原理：
地高辛標(biāo)記技術(shù)源于一種從洋地黃類植物（毛地黃和毛花毛地黃）中提取的類固醇（Steroid）物質(zhì)—— Digoxigenin （DIG），在醫(yī)學(xué)上可用于**各種急性和慢性心功能不全以及室上性心動(dòng)過速、心房顫動(dòng)和撲動(dòng)等**。由于洋地黃植物的花和葉片Digoxigenin在自然界中的**來源，因此抗DIG的抗體不會(huì)與其他的生物物質(zhì)結(jié)合，從而可以滿足特異性標(biāo)記的需要。這一點(diǎn)，正是DIG勝于生物素(Biotin)的地方——同樣是小分子標(biāo)記物，生物素廣泛存在于各種組織中，對(duì)于靈敏度很高的標(biāo)記檢測(cè)實(shí)驗(yàn)來說，樣品自身含有的內(nèi)源生物素，就會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生干擾。地高辛就能夠很好地避免這個(gè)問題。
技術(shù)特點(diǎn)：
與放射性標(biāo)記和檢測(cè)技術(shù)相比較，DIG 系統(tǒng)具有一下多個(gè)優(yōu)勢(shì)：
è高靈敏度，完全可滿足實(shí)驗(yàn)需要，某些方面甚至可與放射性標(biāo)記的靈敏度向媲美
è曝光時(shí)間短，結(jié)果顯示時(shí)間以分鐘計(jì)算，無需幾小時(shí)甚至幾天的自顯影過程
è**環(huán)保，不接觸放射性物質(zhì)，不會(huì)對(duì)環(huán)境造成污染
è探針可重復(fù)使用，*少可以穩(wěn)定儲(chǔ)存一年
è可輕松進(jìn)行探針撥離和重探
è憑借多年的經(jīng)驗(yàn)和眾多使用者的反饋意見，提供**的應(yīng)用指南
應(yīng)用領(lǐng)域：
地高辛系統(tǒng)能夠**高效地標(biāo)記DNA, RNA或是寡聚核苷酸探針，這些探針可以被廣泛地應(yīng)用在
èSouthern blotting, dot blotting
èNorthern blotting
èArray
èColony hybridization
èIn situ hybridization
èELISA
技術(shù)細(xì)節(jié)：
DIG 通過一個(gè)含有11個(gè)碳原子的空間臂與尿嘧啶核苷酸上的C5位置相連，一定濃度的DIG標(biāo)記的核苷酸可以通過DNA polymerase(如E.coli DNA Polymerase, T4 DNA Polymerase, T7 DNA Polymerase, Reverse Transcriptase, Taq DNA Polymerase ）、RNA polymerase (如SP6, T3或T7 RNA Polymerase)或是末端轉(zhuǎn)移酶（Terminal Transferase）的作用摻入到核苷酸探針中；也可通過隨即引物標(biāo)記（random primed labeling）, 缺口平移（nick translation），PCR，3’端標(biāo)記/加尾或是體外轉(zhuǎn)錄制備帶有DIG標(biāo)記的探針。當(dāng)然也可以通過化學(xué)合成的方法進(jìn)行核苷酸的標(biāo)記。
Fig. Structure of Alkali-liable Digoxigenin(DIG)-dUTP
對(duì)于DIG 標(biāo)記探針的雜交檢測(cè)，可選用連接有堿性磷酸酶（alkaline phosphatase），過氧化物酶(peroxidase),熒光素（fluorescein）,若丹明（rhodamine）或是膠體金（colloidal gold）高親和性的抗DIG抗體共軛物；也可選用不帶任何共軛連接的抗DIG抗體和二級(jí)抗體。
檢測(cè)的靈敏度主要依賴于對(duì)不同抗DIG抗體共軛物顯示方法的選擇。以連接有堿性磷酸酶的抗DIG 抗體為例：即可以使用NBT或BCIP做底物的顯色法，也可以使用HNPP熒光堿性磷酸酶底物，檢測(cè)的靈敏度常規(guī)可達(dá)到0.1pg (Souther blot)。
